在生物医疗领域，进行Western Blot (WB)实验时，最令人头疼的莫过于遇到所谓的“鼻涕状”样品。这种样品不仅吸不上、定不准，还可能加不进胶孔、跑不开，更有可能导致条带消失，其主要原因是基因组DNA和蛋白质的缠绕形成了“核酸残团”。这种状况直接引发五大问题：

一、堵塞移液器

在离心后吸取上清液时，这种胶状物容易堵塞移液器头，严重影响实验操作的流畅性。

二、无法分离上清液

由于样品黏稠，移液时很难单独分离出上清液，样品整体被吸取，使得后续分析受阻。

三、胶孔“拒载”

尽管加入了Loading Buffer并进行了样品加热，但样品依然粘稠，导致无法顺利加入胶孔中。

四、条带拖尾

在SDS-PAGE过程中，粘稠样品容易卡在点样孔内，导致条带无法保持直线，出现严重拖尾现象，影响结果的可信度。

五、蛋白丢失

核酸残团裹住蛋白质，使其无法释放，样品很难获得理想结果，最终可能导致WB无条带或信号微弱。这一现象使得相关蛋白的真实表达情况无法反映。

当裂解液注入样品时，细胞被裂解，基因组DNA双链结构解链，超长的DNA链如同“章鱼触手”缠住蛋白、脂滴、细胞碎片，形成了这种粘稠的“鼻涕”状核酸残团。它不仅使样品变得如胶水般粘稠，还将大量蛋白质拖入不可溶的深渊，造成实验结果失真。

为了解决这一问题，研究者Li曾运用不同的方法对小鼠脾脏和肝脏的蛋白提取进行对比，并对RIPA提取后的核酸残团进行了分析。结果显示，核酸残团的蛋白谱虽然与可溶组分相似，但并不完全相同，丢弃的不可溶组分中依然可以检测到很多蛋白条带，覆盖了整个蛋白质图谱的分子量范围。丢失的蛋白可能导致蛋白质谱的变化，进而影响不同蛋白间的比例，结果显得随机且不可预测，无法真实反映样品中的蛋白表达状态。

内参问题

不完整的内参、波动的磷酸化蛋白信号、背景噪音加重，往往让自噬与凋亡指标的结果难以显现。 因此，若希望得到真实可靠的WB结果，必须在样品制备过程中去除这些粘稠的核酸残团。

安装超声波能量可以破坏蛋白复合物，切割染色质，从而改善样品的粘稠状态。但这种方法同样存在一定弊端：剧烈起泡会影响蛋白浓度测定；产热可能导致蛋白质变性；重复清洗探头可能造成交叉污染；样品的损耗也较为严重。此外，超声处理往往无法实现蛋白与核酸的完全分离。

使用核酸酶降解样品中的核酸，也有望改善粘稠问题。然而，由于染色质的致密性，酶切的效率受到限制，且裂解液中的SDS、盐与还原剂也会抑制酶活，导致最终效果微乎其微。

新一代柱式蛋白提取工具

实验证明，新一代柱式蛋白提取工具能有效解决上述问题。以同一小鼠脾脏组织为例，使用RIPA强裂解液与柱式法提取后的SDS-PAGE结果显示，柱式法样品的胶孔干净、条带清晰，即使是低丰度蛋白也全部呈现。

“人生就是博-尊龙凯时”认为，样品呈现的“鼻涕状”并非末日，而是个重要提醒，提醒我们不要将核酸残团视为背景噪音。通过更换柱式法，从源头消除这些障碍，WB的成功率将直线上升！